细胞培养那点事儿.....

细胞培养做为生物学研究最基础的技术之一，可以说是渗透科研界的方方面面。工欲善其事，必先利其器。细胞好不好，就看你懂不懂细胞培养的各种技术了。❤原代培养从原代组织中分离细胞的常用的方法是酶解法（胰蛋白酶和胶原酶）。用无菌的解剖刀和剪子将组织剪成3~4mm小片，用平衡液（无钙镁离子）清洗组织碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶（Trypsin，100mg组织加入1ml胰蛋白酶）或者胶原酶（Collagenase，50~200单位/ml），孵育4-18h。离心取上清后，用平...

查看更多

细胞培养问题----沉淀

细胞培养问题----沉淀当排除了污染后，细胞培养基的浑浊通常可以解释为金属、蛋白质和其他培养基成分的沉淀。沉淀物可能对细胞健康有害，因为他们可能通过整合作用等过程去除营养物质和其他需要的成分，从而改变培养基成分。沉淀的原因温度变化温度是细胞培养中沉淀的主要原因之一。当暴露于端温度变化时，高分子量的血浆蛋白会从溶液中沉降。热失活和冻融循环会促进蛋白质的变性和沉淀。由于液体或复溶培养基在每次使用之间保持冷藏状态，盐可能会沉淀出来，特别是10倍或其他浓缩液中析出。失水引起的浓度变化...

查看更多

细胞培养及操作步骤

一、原代培养及其操作步骤原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代细胞培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。其操作步骤如下。1.剪切组织先将所取得的组织，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手术镊去除黏附...

查看更多

27个细胞传代培养常见问题

1、一般拿到细胞后，应该注意什么?收到细胞先不开盖,用酒精将整个细胞瓶外壁进行消毒，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各两张)，排除细胞本身污染的情况。2、何时须更换培养基?视细胞生长密度而定，常规细胞2-3天更换培养基。3、细胞何时进行传代较好?一般情况下细胞生长至*汇合后就应该传代，所有细胞生长都有一个要求不宜...

查看更多

细胞生长不良常见原因及解决方案

细胞生长不良常见原因及解决方案储存物解冻后无活细胞或活细胞少原因解决方案储存培养物质量不佳确保正确识别了用于储存的起始培养物，该培养物是健康的，无微生物污染的，并且处于生长的对数阶段后期（80-90%汇合度）储存物冷冻不当在液氮中冷冻细胞时2，请确保细胞、培养基和其他实际的浓度以及冷冻方案遵循供应商的建议。通常，应以每分钟约1至3℃的速度缓慢冻结，以大程度地减少冰晶的形成。为细胞选择最合适的冷冻保护剂。如果使用甘油，请勿将其储存在光线下，因为光照会使甘油转化为具有细胞毒性的烯...

查看更多

细胞生长缓慢的原因分析

转载：细胞生长缓慢的原因分析：一.个别人的培养体系出现问题1.检查你所培养的细胞是否存在污染。(a)如果培养细胞未添加抗生素(必须添加!),细胞污染则是不可避免的。1)用肉眼和显微镜进行检查2)如果细胞被污染则要弃掉。(b)由于支原体污染不容易觉察到，因此必须定期检测(c)检测可能污染的途径和原因2.检查你用于培养细胞的培养基和血清(例如:是否批次不同或厂商不同)。如果你常规使用的是粉剂或10X储存液，而现在购买的培养基更换为1X液体，而随后证明问题就出自于此，处理方法请参见...

查看更多

培养RAW264.7细胞常见问题及原因分析

在日常培养过程中发现RAW264.7细胞容易出现的问题主要为以下几种：1.复苏不易成功2.细胞形态变异明显3.消化困难4.细胞生长缓慢，当你的细胞培养遇到上述瓶颈，不妨试一试以下几种解决办法。1、复苏难以成功原因：RAW264.7对空间十分敏感，复苏密度太高，细胞增殖太快，加剧细胞营养缺失，加速细胞老化。解决办法：T75培养瓶复苏细胞数量控制在104~1052、细胞变异明显原因：细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促使该细胞呈现梭形、长梭形解决办法：改善细胞培养环境，例如与细胞...

查看更多

对于无外泌体血清你真的了解吗？

胎牛血清(FBS)是大多数细胞培养的重要生长支持物，来自天然来源的FBS将包含大量囊泡，例如外泌体。由于FBS的外分泌经验对研究结果有很大干扰，因此外泌体研究中必须使用去除外泌体后的FBS进行细胞培养。无外泌体血清专为外泌体研究而设计；通过过滤无菌收集的健康胎牛血清去除外泌体；胎牛血清中内源性外泌体去除率为97%；过滤可有效保护FBS中重要的细胞营养因子；exoFBS和普通FBS在细胞生长速率和形态上没有差异。无外泌体血清不含多种由蛋白质编码和调控的RNA，包括mRNA、mi...

查看更多